产品特点

超宽线性范围

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产品检测线性范围为4.8×10⁷ to 2.5×10⁹ Capsids/mL。

自带AAV2质控品

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ELISA试剂盒产品自带AAV2质控品，无需单独购买。

高检测精密度

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产品批内差≤10%，批间差≤15%，保证滴度测定精密度。

灵活配置

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8孔x12条，提供96次检测，可拆卸板条，灵活取用，随取随用。

产品列表

检测原理

• AAV2滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒

  金斯瑞AAV2滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒利用了两种抗AAV2衣壳蛋白的单克隆抗体，它们可与衣壳蛋白的不同表位结合。当标准品或样品加入捕获板时，AAV2衣壳蛋白可以被包被在捕获板上的抗衣壳蛋白捕获抗体捕获。然后在体系中加入与生物素结合的抗衣壳蛋白检测抗体，该检测抗体可以与捕获板上结合的衣壳蛋白相互作用。随后添加的链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物 （Streptavidin-HRP）可与生物素偶联的抗衣壳蛋白抗体（Biotin Anti-AAV2 Antibody）相互作用。在洗涤步骤后，加入3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺溶液（TMB溶液），可在体系中形成蓝色复合物。通过添加终止溶液终止反应。终止溶液可使的体系颜色从蓝色变为黄色。颜色强度可以通过酶标仪在450nm和650nm处读取。测试样品中衣壳蛋白的浓度可根据衣壳蛋白标准曲线实现精确定量。

  

  Figure 1：AAV2滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒检测原理

验证数据

• 高准确度和回收率

  回收率用于确定分析物检测是否受样品基质差异的影响，通过将已知量的分析物加标到不同的样品基质中来验证回收率。以下是根据具有代表性的准确度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3批次试剂盒（Cat. No. L00942, GenScript），将已知量的分析物加标到基质中混合验证回收率，样本重复测量3次。根据性能评估结果，回收率应在80%-120%，则认为样品基质对准确定量分析物的能力影响最小。

  Table 1：三批次试剂盒回收率测试结果

  批次	重复次数	平均测值 Capsids/mL	回收率
  			实测	标准：80%-120%
  #1	3	1.99E+09	93%	符合
  #2	3	2.05E+09	117%	符合
  #3	3	1.86E+09	95%	符合

• 高检测精密度

  A. 批内精密度/重复性

  批内精密度验证体现测定板内每孔之间的重复性，有助于确保在测定板的不同孔中运行样本检测可以给出可靠的结果。

  以下是根据具有代表性的批内精密度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用试剂盒（Cat. No. L00942, GenScript）分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本计算10次测量浓度结果的平均值（M）和标准差（SD），计算变异系数（CV）。根据性能评估结果，所测结果%CV应低于10%，表明该测定具有良好的重复性。

  Table 2：三批次试剂盒批内精密度验证结果

  批次编号	重复次数	平均测值 Capsids/mL	%CV
  			实测	标准：≤10%
  #1	10	1.37E+08	5%	符合
  #1	10	4.71E+08	3%	符合
  #1	10	1.87E+09	4%	符合
  #2	10	1.65E+08	3%	符合
  #2	10	5.15E+08	2%	符合
  #2	10	1.99E+09	3%	符合
  #3	10	1.41E+08	5%	符合
  #3	10	4.64E+08	4%	符合
  #3	10	1.79E+09	5%	符合

  B. 批间精密度

  批间精密度体现同一样品在多批测定间的重现性，有助于确保在不同批次试剂盒中运行样本检测可以给出可靠的结果。

  以下是根据具有代表性的批间精密度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3个不同批次试剂盒（Cat. No. L00942, GenScript）分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本计算30次测量浓度结果的平均值（M）和标准差（SD），计算变异系数（CV）。根据性能评估结果，所测结果%CV应低于15%，表明该测定具有良好的批间精密度。

  Table 3：三批次试剂盒批间差验证结果

  批次数量	重复次数	平均测值 Capsids/mL	%CV
  			实测	标准：≤15%
  3	3×10	1.47E+08	9%	符合
  3	3×10	4.83E+08	5%	符合
  3	3×10	1.88E+09	6%	符合

• 交叉作用验证

  根据AAV2滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒产品手册中的操作指南进行相关AAV滴度测定。将血清型1、2、5、6、8、9和DJ的AAV空载衣壳蛋白作为样品，以各自不同的浓度添加到ELISA试剂盒微孔板中。检测得到的OD值如下。

  血清型	衣壳蛋白浓度	吸光度（450/650nm）
  	(Capsids/mL)	重复1	重复2	平均值
  AAV 1	1.07E+10	0.0124	0.0118	0.0121
  AAV 2	1.20E+10	4.975	5.0119	4.99345
  AAV 5	4.29E+10	0.0149	0.0128	0.01385
  AAV 6	3.13E+10	0.0169	0.0153	0.0161
  AAV 8	2.31E+10	0.0162	0.013	0.0146
  AAV 9	1.22E+10	0.0138	0.014	0.0139
  AAV DJ	1.48E+10	0.0138	0.0131	0.01345
  空白对照 （仅缓冲液）	0	0.0134	0.0114	0.0124

  AAV2衣壳蛋白样本的OD值高于空白对照的OD值，而所有其他测试血清型的AAV衣壳蛋白样本的OD值都在背景范围内。AAV2滴定衣壳蛋白ELISA试剂盒为AAV2滴定进行了特定校准，不能应用于其他血清型的AAV的滴定测定。

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