结果：基因敲入效率效率提升高达 30% （较之常规质粒）
- CRISPR基因敲入（敲入2.5 kb 片段）
- 转座子基因敲入（敲入4.8 kb 片段）
常规用于目的基因递送的质粒，载体骨架序列一般＞1.5 kb，且通常含有抗生素抗性基因。抗性基因虽然方便了细菌的筛选与培养，但在基因与细胞治疗等领域，抗性基因残留存在带入体内的风险，导致耐药性上的安全隐患。同时，载体骨架小，则具有毒性更低、免疫原性更低、表达更稳定、转染效率高的优势，进而提升RNA转录水平、蛋白表达水平。
因此，金斯瑞开发了GenCircle dsDNA，一种无抗性标记小型环状双链DNA载体合成服务，质粒骨架仅400bp+，去除抗性基因、细菌源序列、 宿主菌株外不会复制。金斯瑞可定制合成包含您目的基因的GenCircle dsDNA，提升基因与细胞治疗研究的安全性与效率。
| 服务名称 | 级别 | 目的基因长度* | 交付量* | 交付形式 | 周期 # | 应用领域 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| GenCircle dsDNA |
工业级 | 1-20kb | 100μg - g |
冻干粉 / 液体 （缓冲液可选） |
11天起 |
|
| 临床前级 |
|
# 客户可以选择：1. 在金斯瑞合成基因后构建GenCircle dsDNA；2. 客户自己提供已经合成好的含目的基因的质粒直接构建GenCircle dsDNA。
* 8kb以上详询技术支持，其他目的基因长度和交付量欢迎详询，邮件发送至oligo@lishanghui.com或拨打电话400-025-8686转5812或5815，专业技术支持为您服务。
# 此周期不含基因合成周期。
| QC项目 | 标准 | 工业级 | 临床前级 |
|---|---|---|---|
| 分光光度计 | 交付量保证 | ||
| Sanger测序 | 100%序列正确 | ||
| A260/280 | 1.8-2.0 | ||
| 限制性酶切分析 | 酶切后凝胶电泳分析与预期大小一致 | ||
| 宿主RNA残留AGE分析 | 条带不被检出 | ||
| 宿主DNA残留检测分析 | AGE灰度分析不被检出 (GIS=0) | ||
| qPCR检测分析 (≤5%) | |||
| 质粒超螺旋含量AGE分析 | 超螺旋程度高级别质粒≥90% | ||
| TAL内毒素检测 | ≤0.01EU/μg | ||
| ≤ 0.005 EU/μg | |||
| 生物负载检测 | 48小时无可见细菌/真菌生长 | ||
| 残留宿主蛋白 (HCP ELlSA) | ≤1% | ||
| PH检测 | TE缓冲液：8.00±0.50 ddH2O：（5.00-7.00）±0.50 PBS：7.40±0.50 Tris：7.88±0.50 |
结果：基因敲入效率效率提升高达 30% （较之常规质粒）
结果：病毒滴度提升到高达 3倍 、ITR序列更稳定、规避抗性基因（较之常规质粒）
| 组别 |
病毒滴度 (IFU/ml) |
抗性基因 |
|---|---|---|
| pRRL-PGK-EGFP （常规质粒） |
1.23E+8 | 检出 (Ct value<30) |
| pRRL-PGK-EGFP MF （GenCircle dsDNA） |
3.81E+8 | 未检出 (Ct≥35 ) |
| 组别 |
病毒滴度 (copies/ml) |
抗性基因 |
|---|---|---|
| CMV EGFP AAV2 （常规质粒） |
1.12E+12 | 2% |
| CMV EGFP MF （GenCircle dsDNA） |
1.22E+12 | 未检出 |
结果：转录水平提升高达 4倍 ，减少免疫反应（较之常规质粒）
结果：蛋白表达水平提升高达 39% （较之常规质粒）
GenCircle dsDNA服务成功交付全球多个订单，涵盖不同长度的目的基因，包括多个难度项目。
